作者：章晓霞，李发爵，李湘成，陈民等，景德镇市第三人民医院检验科，南昌美康盛德医学检验实验室有限公司，浙 江大学医学院附属邵逸夫医院检验科

欧蒙印迹法中所包被的抗原均为生化特性明 确的纯化抗原，因此具有良好的检测敏感性[1]。 操 作过程中，模条本底颜色变深、扫描不报警的现象 时有发生；但本底颜色很深及扫描报警，显示“不 可用的”情况也偶有发生，表明实验失败，复查也 如此，报告发不出。 2020 年 12 月 18 日和 2021 年 1 月 1 日 2 名住院患者 ANA 谱 3 模条 （15 项）颜 色很深及扫描报警，显示“不可用的”；经进一步分 析为球蛋白增多，增加了模条的吸附所至。 血清经 适当稀释，减少球蛋白的含量，从而减少吸附达到 可以扫描，不报警，实验成功的目的；再加做间接 免疫荧光 （IIF：HEp-2 细胞），ANA 谱 3 报告就可 以安心发出。 现报告如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 2 病例均来自抚州市第一人民医院 住院病人，其中病例 1，游某，男，51 岁，临床诊断： 肺部感染、乙型肝炎后肝硬化失代偿期、低蛋白血 症、胸腔积液、脾大。 病例 2，罗某，女，47 岁，临床 诊断：肾病综合症、狼疮性肾炎、甲减、高血压病等。

1.2 检测方法 ANA 谱 3 采用欧蒙免疫印迹法，在 全 自 动 EUROBlotMadter Ⅱ 仪 、 佳 能 CanoScan LiDE120 扫描仪及配套试剂上进行；IIF 采用欧蒙 试剂及 EUROStar Ⅲ Plus 荧光显微镜上进行。 结 果见表 1、图 1~图 8。

2 讨论

病例 1，ANA 谱 3 模条本底颜色很深，未见质 控带，扫描报警，提示“不可用的”，见图 1、图 2；说 明实验失败，复查也如此，经与欧蒙工程师沟通， 告知给病人退费。 笔者通过 1:3 稀释血清，模条显 示较清晰质控带，经扫描后质控带显示 1 个“+”， 未出现报警（正常质控带显示黑色+～+++为合格）， 结果为 ANA 谱 3 所有项目阴性，见图 3、图 4。 再 经 IIF 的验证：S＜1:100（参考值：＜1:100）、核型：阴 性，见表 1。 最终报告该病人 ANA 谱 3 所有项目为 阴性。 病例 2，ANA 谱 3 模条本底颜色较深，见模糊 质控带，扫描报警，提示“不可用的”，见图 5、图 6， 说明实验失败。 通过 1:2 稀释血清，模条显示较清 晰质控带，经扫描后质控带显示“++”，未出现报 警，结果为抗 SSA、Ro-52、ds-DNA、ANuA、Histone 抗体分别为 1 个“+”，见图 7、图 8。 因血清 1:2 稀 释，所以该病人 ANA 谱 3 上述 5 项抗体分别报告 2 个“+”是较准确的。 IIF 结果 S=1: 640、核型为均 质；其它（ds-DNA（ELISA）633.34 IU/mL、荧光强阳 性，也可说明这一点，见表 1。 对于某些患者的特殊情况（例如临床用药、肝 功能异常等）导致血清样本中非特异蛋白质、胆红 素或血脂等含量增加， 上述物质可能会被吸附到 膜片上，最终导致非特异性背景颜色的增强[1]。 病 例 1 乙型肝炎后肝硬化失代偿，肾功能轻度异常， 肝纤 4 项升高，除轻度黄疸（TBil21.7 umol/L）外、 血脂偏低，球蛋白升高明显（64.3 g/L）；病例 2 肾病 综合症、狼疮性肾炎，胆红素、血脂正常，IgG 达到 2 580 mg/dL（参考值：751~1 560 mg/dL），TP63.6g/L、 ALB26 g/L、GLB37.6 g/L，也就是球蛋白升高。 所以 笔者认为模条颜色变深可能主要与病人球蛋白升 高相关，球蛋白越高模条颜色越深，甚至导致扫描 不成功，显示“不可用的”，实验失败。 通过对血清 的适当稀释，减少球蛋白的含量，从而降低模条的 吸附及本底颜色，以达到可以扫描，不报警，实验 成功的目的。 扫描结果×稀释倍数即为最终报告结 果；加做 IIF 报告可进一步增加可信度，因为 HEp2 细胞中包含 100~150 种自身抗原，美国风湿病学 会（ACR）已将间接免疫荧光检测推荐为检测 ANA 的“金标准”[2]，中国免疫学会临床免疫分会、欧洲 自身免疫标准化促进会 （EASI） 将其推荐为 ANA 检测的“参考方法”[3-5]。 值得注意的是，荧光显微镜 的质量和荧光光源强度及滤光器的配置要好，否则 会影响结果判断的准确性[6]。 有些研究中，在深色背景下，只要能观察到特 异性抗原位置条带阳性，均可视为明确阳性；若背 景颜色过深而严重影响到结果判读， 则样本不适 用于该检测体系，可考虑采用其他的检测方法（如 ELISA）进行检测。 但本研究中血清稀释法再加上 IIF 作为补充也不失为一种简便易行的方法。 由于 观察样本例数有限， 在今后的工作中增加观察例 数及与临床的结合， 以对此类问题有一个比较全 面的了解。

参考文献略。

来源:章晓霞,李发爵,李湘成等.欧蒙免疫印迹法（ANA谱3）模条本底颜色变深对结果影响2例分析[J].实验与检验医学,2023,41(04):530-532.